Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的全过程中逐渐扩展

从第一次经常出现家兔自身HIV到经常出现1改型癌症外科症状的重大突破亲率在婴幼儿初就有很好的描述，多个家兔自身HIV白血病的婴幼儿中的有70%在血清转换后10年内患上癌症，而随访15年的婴幼儿这一人口比例减低到84%。相较之下，占外科1改型癌症一半以上的改型1改型癌症的发病组态还没有得到应有的学术研究。

愈发多的人开始可用分期系统来下定义1改型癌症的重大突破：个躯在经常出现多种家兔自身HIV时进入第1阶段性，经常出现浓度异常时进入第2阶段性，经常出现症状时进入第3阶段性。一些多发家兔自身HIV白血病的个躯，在1期和2期，重大突破较慢，并发展为发病的1改型癌症。我们前描述了一第三组在首次检测到多种家兔自身HIV结果显示后至更少10年无癌症的正因如此慢重大突破者，这第三组病患人数更少，但外观上非常确切。随后，我们发现家兔自身复合物HIVCD8+T蛋白质重排在重大突破快速的病患中的基本不假定，但在近期发病和长期假定的癌症病患中的很更易检测到。这可能证明，与重大突破病患相较，这些病患诱发重排的调节减弱。

早期学术研究证明，尽管调节性T蛋白质(Treg)需求量正常人，但癌症病患假定一些功能缺陷，其中的除此以外对IL-2的重排技能减低。此外，癌症病患中的的不稳定性CD4+T蛋白质可能对调节更为重要抵抗性，发挥为不稳定性T蛋白质的可抑制减弱，自然现象产生的Treg和躯外产生的诱导Treg，以及复合物经历的CD4+T蛋白质中的IL-2重排减弱。本学术研究的目的是描述了CD4+调节性T蛋白质(Treg)在一小群正因如此快速重大突破者中的的外观上，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

工具：BOX学术研究是一项以人群为基础的斜向学术研究，在21岁都有确诊的病患亲属中的检查1改型癌症的致命环境因素。我们前描述了长期快速重大突破者的外观上，他们保有多重家兔自身HIV白血病超过10年，但没有经常出现癌症的外科症状，慢性或非开展性诱发。随后，10名继续保有无癌症并愿意提供大量血液结果显示的快速重大突破者不属于T和B蛋白质功能研究。在目前的学术研究中的，8名慢重大突破者(SP第三组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的家兔自身HIV白血病。所有的参加者都处于1改型癌症重大突破的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身HIV对某些复合物的白血病重排，然而，一名病患已经处于2期至更少6年，但没有经常出现外科症状，一名病患被诊断为癌症，该受测者72岁，在热带植物实验结果显示时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据研究中的对该NAD开展了另行评估。分离外周血单个核蛋白质(PBMCs)，使用多参数流式蛋白质术和T蛋白质可抑制试验评估NAD中的Treg的频亲率、表改型和功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)开展无全权负责聚类研究，评估Treg表改型。

结果：与卫生NAD相较，来自慢重大突破躯的思绪CD4+T蛋白质的全权负责聚类推测，诱导的思绪CD4+ Treg频亲率减低，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)传达减低有关。一名HbA1c增大的病患与重大突破快速者和最简单的解读第三组相较，Treg谱大致相同。功能研究证明，与卫生NAD相较，来自快速重大突破躯的Treg介导的CD4+不稳定性T蛋白质可抑制明显受损。发挥为对不稳定性CD4+T蛋白质CD25和CD134传达的可抑制减低。

左图1 深入的表改型研究推测，CD4+Treg亚改型在慢重大突破函数调用中的减低。由FlowSOM分解成的Treg室，组织起来在来自所有NAD的光阴CD4+CD45RA -蛋白质上。根据记号物传达鉴定出10个元簇:思绪T蛋白质_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T蛋白质;HLA-DR + GITR +思绪T蛋白质;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)可用9个不同Treg记号分解成的10个元簇的MST。每个端口推选一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在端口第三组外面上色。每个端口中的的煎饼左图暗示单个记号的传达级别。(b)每个元聚类的热左图，以推测结构上记号传达。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)分解成左图，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的很薄。(e-l)比起稀土元素为每个metacluster箱内曲两条路线左图(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP第三组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T蛋白质(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T蛋白质(l)。绿色白点推选**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 可用CITRUS的预测模改型证实，Treg频亲率的减低是重大突破快速的图标。分级旁路(a - f)和橄榄研究(g-k)比较SP参加者和最简单的HD参加者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群躯的推选性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达开展分离，模拟器FlowSOM社会群躯。(b) HD(黑点)和SP(星点)第三组以及NADSP 606(绿色)中的CD25+ cd127的频亲率汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路子集的箱内曲两条路线左图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)甜菜簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，箭头突出的簇被识别系统为SP和HD函数调用彼此之间的不同。(j)箱内曲两条路线左图推测了在SP(星点)和HD(灰点)第三组中的，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的比起稀土元素(人口比例)。(k)直方左图推测每个簇的表改型(粉红色)和Treg记号比起传达与背景传达(橙色);上列，CPUTreg_3;上头动身，CPUTreg_4。背景与所有其他簇中的记号的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩检验

左图3 与卫生献血者相较，重大突破快速者思绪treg的GITR减低。每个思绪CD4+T蛋白质元簇(思绪T蛋白质_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T蛋白质;HLA-DR + GITR +思绪T蛋白质;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个传达记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的传达热左图(sp606不除此以外在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中的所有HD(白色)、所有SP(橙色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR传达接在，推测直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon配对小写字母秩和检验，p< 0.07(绿色)所有NAD除此以外，p< 0.05(橙色)NADSP 606和最简单的HD不除此以外在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR传达，从分级旁路，从所有HD(白色)、所有SP(橙色)和SP 606(绿色)接在，推测直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写字母秩检验

左图4 来自快速重大突破的CD4+ treg蛋白质控制不稳定性CD4+T蛋白质的技能减低。SP第三组用橙色的两条路线和白点暗示，HD第三组用黑色的两条路线和白点暗示，绿色的两条路线/白点暗示NADsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质开展分选。CD4+CD25−(；也者)被记号为CFSE, Treg按掩蔽的人口比例反应物。用抗CD3 /28微珠转化蛋白质，人才3天后开展流式蛋白质术检测。(a-d)与CD4+；也者比起应的treg人才(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制人口比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制人口比例。可用白血病解读(诱导的响应蛋白质不含treg)数值可抑制人口比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 不稳定性CD4+T蛋白质对快速重大突破的T蛋白质转化的可抑制更敏感。SP第三组用橙色的两条路线和白点暗示，HD第三组用黑色的两条路线和白点暗示，绿色的两条路线/白点暗示NADsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质开展分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel记号，treg按掩蔽的人口比例反应物。用抗CD3 /28微珠转化蛋白质，人才3天后开展流式蛋白质术(CD25反染)和蛋白质因子研究。HD Treg与HD、SP或sp606；也者一同人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制百份(b)。(c,d) CD25可抑制百份(c)和CD134可抑制百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才中的的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们得出的论证是，来自快速重大突破子的转化思绪CD4+Treg在GITR传达中的得到了扩展和多样化，强调了再进一步学术研究Treg在1改型癌症风险个躯中的的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28